炎症因子通过miR-33a-5P抑制巨噬细胞胆固醇外排的研究

【摘要】目的：动脉粥样硬化会导致包括冠状动脉粥样硬化性心脏病，脑卒中和外周血管病等疾病，严重危害人类的健康。炎症反应和胆固醇过量聚集是血管动脉粥样硬化发生发展的两个关键环节。即使在无传统的危险因素（血脂异常、高血压等）作用下，单独的炎症也可促进动脉内膜增生和脂质聚集，导致动脉粥样硬化斑块的形成。巨噬细胞是动脉粥样硬化斑块中泡沫细胞的主要来源，巨噬细胞的胆固醇外排受损影响动脉粥样硬化的发生发展。巨噬细胞胆固醇外排主要由ABCA1和ABCG1介导。ABCA1介导巨噬细胞内的胆固醇和磷脂外排到乏脂的载脂蛋白（apoA-I），ABCG1介导巨噬细胞内的胆固醇外排至富脂的载脂蛋白（HDL）。miR-33a定位于的其宿主基因SREBP-2的16号内含子区域，与SREBP-2共转录，SREBP-2调控细胞内的胆固醇摄取和合成。miR-33a-5P通过与ABCA1、ABCG1mRNA的3’UTR结合，抑制ABCA1和ABCG1mRNA的翻译，调控细胞内的胆固醇外排。课题组前期的研究已经证明：炎症通过打破SREBP2-LDLR负反馈调节，促进THP-1源性巨噬细胞内胆固醇的聚集。我们也发现，炎症能够抑制ABCA1和ABCG1介导的胆固醇外排。然而,具体的机理尚不清楚。本研究将探讨炎症因子是否通过激活THP-1源性巨噬细胞miR-33a-5P的表达，抑制ABCA1/ABCG1的表达和胆固醇外排。材料与方法:使用白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)，在有、无低密度脂蛋白(LDL)负荷下，刺激THP-1源性巨噬细胞。利用慢病毒感染THP-1源性巨噬细胞，使细胞内高表达miR-33a-5P或者Anti-miR-33a-5P，感染空病毒（Con-miR或者Con-Anti-miR）的细胞作为对照组细胞。细胞经过炎性因子、高表达miR-33a-5P、高表达Anti-miR-33a-5P等处理后，采用油红O染色检测细胞脂质的聚集，采用酶法测定细胞内胆固醇含量，采用荧光标记胆固醇法(BODIPY-cholesterol)检测apoA-I介导的胆固醇外排。采用实时荧光定量RT-PCR和Westernblotting检测相关分子（miR-33a-5P、SREBP-2、ABCA1和ABCG1）基因和蛋白的表达。结果：1.本实验表明，无论有无LDL负荷下，炎症因子IL-6或TNF-α均能够促进THP-1源性的巨噬细胞脂质的聚集，增加总胆固醇和胆固醇酯的含量。炎症因子能够抑制apoA-I介导的胆固醇外排，增加miR-33a-5P的表达，上调SREBP2mRNA和蛋白的表达，降低ABCA1和ABCG1mRNA和蛋白的表达。2.本实验表明，无论有无LDL负荷下，炎症因子和高表达miR-33a-5P均能促进胆固醇的聚集，抑制ABCA1/ABCG1介导的胆固醇外排。然而高表达Anti-miR-33a-5P能够逆转炎症因子对胆固醇外排的抑制作用，抑制巨噬细胞脂质的聚集，降低胆固醇的含量，增加apoA-I介导的胆固醇外排，抑制miR-33a-5P的表达，增加ABCA1和ABCG1mRNA和蛋白的表达。结论：炎症因子通过激活THP-1源性巨噬细胞miR-33a-5P的表达，抑制ABCA1/ABCG1的表达及其介导的胆固醇外排。本课题表明miR-33a-5P在炎症反应和胆固醇稳态中起到了重要的作用，Anti-miR-33a-5P有助于抑制炎症导致的巨噬细胞的泡沫化。
【作者】毛敏；
【导师】雷寒；
【作者基本信息】重庆医科大学，内科学，2014，博士
【关键词】炎症因子；胆固醇外排；miR-33a-5P；ABCA1；ABCG1；

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